[1]张玢,余多慰.Trichoderma reesei纤维素水解酶的糖苷合成性质[J].南京师大学报(自然科学版),2007,30(02):69-76.
　Zhang Bin,Yu Duowei.Glycoside Synthesis Ability of a Cellulase From Trichoderma reesei[J].Journal of Nanjing Normal University(Natural Science Edition),2007,30(02):69-76.
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Trichoderma reesei纤维素水解酶的糖苷合成性质()
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《南京师大学报（自然科学版）》[ISSN:1001-4616/CN:32-1239/N]

卷:
第30卷
期数:
2007年02期
页码:
69-76
栏目:
生命科学
出版日期:
2007-06-30

文章信息/Info

Title:
Glycoside Synthesis Ability of a Cellulase From Trichoderma reesei
作者:
张玢;余多慰;
南京师范大学生命科学学院, 江苏南京210097
Author(s):
Zhang Bin; Yu Duowei
School of Life Science,Nanjing Normal University,Nanjing 210097,China
关键词:
Trichoderma reesei;  纤维素酶;  酶活;  糖苷合成;  可逆反应
Keywords:
Trichoderma reesei;  Ce llulase;  enzyme activ ity;  g lyco side synthesis;  rev ers ible reaction
分类号:
TQ925
摘要:
通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(从(Trichoderma reesei天然纤维素水解酶中分离纯化得到了一种相对分子质量约为65 000的蛋白组分.分别以pNP-Glu、pNP-Gal、oNP-Gal和Avicel作为底物,均检出该组分的水解活性.此外该酶对CMC-Na有可被测出的弱活性.以pNP-Glu为底物,45℃时,其水解酶性质的米氏常数Km=3.04 mg/mL,Vmax=3.77μmol/min.用DNS法和对硝基苯酚法(仅对含有对硝基酚结构的底物pNP-Glu、pNP-Gal和oNP-Gal)分别检测了在180m in反应时段内产物还原糖和对硝基苯酚的含量变化, 结果显示在封闭的反应体系中有明显的可逆反应存在, 并出现了周期性振荡的特征, 有糖苷合成活性的表现, 水解产生还原糖和对硝基苯酚的量, 呈现出分别为25.43 8± 34m in 和36. 25 2±50m in 的含量增减振荡周期. 与此同
时, 为了证实该酶糖苷合成活性的存在, 以葡萄糖作为底物与酶反应, 得到了7. 00 ±4. 83m in的葡萄糖含量周期性波状振荡结果. 对底物为pNP- G lu 反应15m in 后的产物作乙酰化处理GC /MS分析, 结果产物中有含二糖结构的产类型, 揭示了这个水解酶的糖苷合成的特点. 这是首次从Trichoderm a reesei纤维素水解酶中分离得到了具有糖苷合成活性的酶.
Abstract:
By PAGE, an enzym e was pur ified from comm ercial C ellu lase, wh ich was ex tracted by T ri- choderma reesei. The mo lecu la rm ass o f the purified enzym e w as 65 000 estim a ted by SDS- PAGE. The purified enzym e had hydro lytic activies correlatingw ith some substrates conta ining p- N itrophany l- β- D - G luopyranoside ( pNP- G lu), p- N itrophany l- β- D - Ga lactopyranoside ( pNP- Ga l), o- N itroph- any l- β- D- Ga lactopy rano side ( oNP- Gal) and Av ice.l The enzym e had w eak activ ity wh ich can be detec ted us ing CMC- Na as substrate. ItsK m w as 3.04m g /m l and V m ax was 3.77 μmo l/m in, using pNP - G lu as substrate, at 45℃ . DNS m ethod and p - nitropheno lm ethod ( only for pNP- G lu、pNP- Ga l and oNP- Ga l as substrate) w ere used to ana ly ze changes o f quantity of reducing sugar and p- nitrophe no l in 180 m in. The resu lts confirm ed that the reversible reactions cha racte ristic of period oscillation have d isplayed in the close reaction sy stem. The quantity change pe riod tim e of reduc ing suger and p- n itro pheno l were 25. 429± 8. 343 m in and 36. 25± 2.5 m in, respec tive ly. Using g lucose as substrate, per iod undu late osc illa tion w as detected also, and the per iod tim e of wh ich was 17± 4. 830 m in. The acety lated products w ere detec ted by GC /M S, using pNP- G lu as substra te, w ith reaction time 15m in. The resu lt confirm ed that the component ex isted conta in ing d isacchar ide structure in the all reaction productions. It confirm ed that the enzym e had characte ristic of g lyco side synthesis. It was firstly d iscovered tha t the en- zym e po ssessed g lycos ide synthesis ac tiv ity of C ellu lose hydro lase from Trichoderma reesei

参考文献/References:

[ 1] 王巧兰, 郭刚, 林范学. 纤维素酶研究综述[ J]. 湖北农业科学, 2004( 3): 14-19.
[ 2] CoughlanM. The prope rties o f funga l and bacteria l ce llu lases w ith comm en t on the ir production and applica tion[ J]. B iotechnol Genet Eng Rev, 1985( 3): 39-109.
[ 3] 阎伯旭, 齐飞, 张颖舒, 等. 纤维素酶分子结构和功能研究进展[ J]. 生物化学与生物物理进展, 1999, 26( 3): 233-237.
[ 4] 齐香君, 苟金霞, 韩戌珺, 等. 3, 5- 二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究[ J] . 纤维素科学与技术, 2004,12( 3): 17-30.
[ 5] 车建美, 刘波, 朱育菁, 等. 尖孢镰刀菌中β- D- 葡萄糖苷酶活性测定条件的研究[ J] . 江西农业大学学报, 2006, 28( 1): 126-128.
[ 6] 萨姆布鲁克. 分子克隆实验指南[M ]. 3版. 北京: 科学出版社, 2002: 387.
[ 7] 程明冬, 王忠民, 石秀花, 等. 葡萄多糖的分离及其单糖组成分析[ J]. 食品与药品, 2006, 8( 5): 52-54.
[ 8] 刘叶民, 徐桂芸. 羟乙基淀粉的羟乙基取代位置的研究[ J]. 分析化学, 2003, 21( 3): 271-276.
[ 9] Shou T, H iroshi I, Ak ira N, et a ,l Overproduction of recom binant Tr ichodem a reese i cellu lases by Asperg illus ory zae and theirenzyma tic properties[ J]. Journal of B io techno logy, 1998( 65): 163-171.
[ 10] Ko ibe J, Kub icek C P. Quantification o f them ain com ponen ts of the Trichode rm a ce llulose com plex w ith m onoc lonal antibodies using an enzym e linked immuno sorbent assay ( ELISA) [ J]. App lM icrob io l B io techno ,l 1990, 34: 26-30.
[ 11] 邬敏辰, 李江华. 里氏木霉固体发酵生产纤维素酶的研究[ J]. 江苏食品与发酵, 1998( 2): 2-6.
[ 12] 余晓斌, 具润谟. 里氏木霉RutC - 30液态法生产纤维素酶[ J]. 无锡轻工业大学学报, 1998, 17( 2) : 6-10.
[ 13] W u B in, Zhao Yue, Gao Peij.i E stim ation of Ce llobiohydro lase IAc tiv ity byNum er ica lD ifferentia tion o f Dynam ic U ltraviolet Spectro scopy[ J]. Acta Bioch im ica et Biophysica S in ica, 2006, 38( 6): 372-378.
[ 14] 阎伯旭, 高培基. 外切葡聚糖纤维二糖水解酶的分离纯化和部分性质研究[ J] . 生物化学杂志, 1997, 13( 3): 362-364.
[ 15] 赵越, 武彬, 阎伯旭, 等. 纤维二糖抑制外切纤维素酶水解作用机理的分析[ J] . 中国科学, 2003, 33( 5): 454-460.
[ 16] M ie ttinen O inonen, Ar ja. Trichode rm aReesei Stra ins fo r Production of Ce llu lases fo r the Textile Industry( VTT Pub lications 550) [M ]. Espoo: VTT Publications, 2004: 22.
[ 17] 阎伯旭, 高培基. 十二烷基磺酸钠所致外切葡聚糖纤维二糖水解酶底物专一性的变化[ J] . 纤维素科学与技术, 1998,6( 3): 10-15.
[ 18] 阎伯旭, 孙迎庆, 高培基. 有限酶切拟康氏木霉纤维素酶分子研究其结构域的结构与功能[ J]. 纤维素科学与技术,1998, 6( 3): 1-8.
[ 19] 高培基, 刘垂. 研究纤维素酶活时测定还原糖方法的选择[ J]. 植物生理学通讯, 1986( 2): 46-48.
[ 20] 管斌, 谢来苏, 丁友昉, 等. 纤维素酶酶活力测定方法的校正[ J]. 无锡轻工业大学学报, 1999, 18( 4): 20-26.
[ 21] 胡莹, 杨凌, 杨胜利. 糖苷酶序列分类法和作用机理的研究进展[ J]. 药物生物技术, 2006, 13( 1): 66-70.
[ 22] 郁惠蕾, 许建和, 林国强. 糖苷水解酶在糖苷合成中的应用概况[ J]. 有机化学, 2006, 26( 8): 1052-1058.
[ 23] Sc ig elovaM, Singh S, Crout DHG, et a.l G ly cos idases! ! ! a g reat synthe tic too l[ J]. Journal o fM o lecular Cata lys isB: Enzymatic, 1999, 6( 5) : 483.
[ 24] 卢丽丽, 肖敏, 赵晗. 糖苷合成酶! ! ! 一类新型的寡糖高效合成工具[ J]. 生物化学与生物物理进展, 2006, 33( 4):310-320.

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[1]管海华,贾秉晟,王家芳,等.一株产纤维素酶和植酸酶的米曲霉的诱变筛选和固体发酵[J].南京师大学报(自然科学版),2011,34(02):83.
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备注/Memo

备注/Memo:
基金项目: 江苏省高校自然科学基金( 03KJBI80064)资助项目.
作者简介: 张 玢( 1982-) , 女, 硕士研究生, 主要从事分子生物学的学习与研究. E-m ail:icesp ringl@ hotm ail.com
通讯联系人: 余多慰( 1954-) , 教授, 主要从事分子生物学的教学与研究. E-m ail:yuduowei@ njnu. edu. cn
更新日期/Last Update: 2013-05-05