[1]刘萍,刘鹏丽,黄琛,等.固定化谷氨酸脱羧酶转化γ-氨基丁酸的研究[J].南京师范大学学报(自然科学版),2020,43(01):107-114.[doi:10.3969/j.issn.1001-4616.2020.01.016]
 LiuPing,LiuPengli,HuangChen,et al.ImmobilizedGlutamateDecarboxylasePreparationandOptimumConditionsofEnrichγ-AminobutyricAcid[J].JournalofNanjingNormalUniversity(NaturalScienceEdition),2020,43(01):107-114.[doi:10.3969/j.issn.1001-4616.2020.01.016]
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固定化谷氨酸脱羧酶转化γ-氨基丁酸的研究()
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《南京师范大学学报》(自然科学版)[ISSN:1001-4616/CN:32-1239/N]

卷:
第43卷
期数:
2020年01期
页码:
107-114
栏目:
·生物学·
出版日期:
2020-03-15

文章信息/Info

Title:
ImmobilizedGlutamateDecarboxylasePreparationandOptimumConditionsofEnrichγ-AminobutyricAcid
文章编号:
1001-4616(2020)01-0107-08
作者:
刘萍刘鹏丽黄琛殷志敏
南京师范大学生命科学学院,生物化学与生物制品研究所,江苏省分子医学重点实验室,江苏南京210023
Author(s):
LiuPingLiuPengliHuangChenYinZhimin
SchoolofLifeSciences,NanjingNormalUniversity,InstituteofBiochemistryandBiologicalProducts,JiangsuProvinceKeyLaboratoryforMolecularandMedicalBiotechnology,Nanjing210023,China
关键词:
卡拉胶谷氨酸脱羧酶γ-氨基丁酸固定化酶
Keywords:
Carrageenanglutamatedecarboxylaseγ-aminobutyricacidimmobilizedenzyme
分类号:
TS201.3
DOI:
10.3969/j.issn.1001-4616.2020.01.016
文献标志码:
A
摘要:
研究卡拉胶制备固定化谷氨酸脱羧酶及转化γ-氨基丁酸(GABA)的最适条件.以本实验室研发的诱导剂对构建的表达谷氨酸脱羧酶(GAD)的基因工程菌进行诱导,并利用卡拉胶对获得的粗酶液进行包埋制备固定化酶,对影响GAD固定化效果和GABA产量的因素进行研究.最佳固定化条件为卡拉胶浓度1.5%,氯化钾浓度3%,硬化时间2h;转化GABA的最适条件为反应最适pH为3.8~4.3,最适温度为37℃~43℃,将制得的固定化谷氨酸脱羧酶(IGAD)重复使用7次后,催化活力仍保持在最初值的75%;IGAD在最适底物浓度60mmol/L下反应时间2h后谷氨酸转化率达99%,利用IGAD进行连续催化反应,最终GABA摩尔转化率为70.98%,晶体得率为91.90%,晶体纯度94.73%.该法具有较好的操作稳定性和较高的底物转化率,为连续化制备γ-氨基丁酸提供参考.
Abstract:
Researchontheoptimumconditionsofimmobilizedglutamatedecarboxylasebycarrageenanandenrichγ-aminobutyricacid(GABA).Thegeneticallyengineeredbacteriaexpressingglutamatedecarboxylase(GAD)wereinducedbytheinducingagentwhichdevelopedbyourlaboratory,andthecrudeenzymesolutionobtainedbythestrainwasembedded-immobilizedwithCarrageenan.FactorswhichaffectedtheimmobilizationeffectofGADandtheyieldofGABAwereinvestigated.TheoptimumconcentrationofcarrageenanandKClwere1.5%and3%,solidifyingfor2h.TheoptimumpHwas3.8-4.3andthetemperaturewas37℃-43℃.Theimmobilizedglutamatedecarboxylase(IGAD)wasrepeatedlyusedafter7times,theactivitywaskeptashighas75%oftheinitial.ContinuousconversionofIGADtoprepareGABA,thereactionwascarriedoutattheoptimumsubstrateconcentrationof60mmol/L,thefinalmolarconversionofGABAwas70.98%,thecrystalyieldwas91.90%andthecrystalpuritywas94.73%.ThemethodhasgoodstabilityandhighsubstrateconversionratewhichmayprovideareferenceforcontinuouspreparationofGABA.

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备注/Memo

备注/Memo:
收稿日期:2019-03-26.
基金项目:江苏省科技厅产学研联合创新基金前瞻性研究项目(BY2013001-03).
通讯作者:殷志敏,博士,教授,博士生导师,研究方向:生物化学与分子生物学.E-mail:yinzhimin@njnu.edu.cn
更新日期/Last Update: 2020-03-15